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        液相色譜儀的主要系統(tǒng)構(gòu)成及特點

         更新時間:2011-07-01 點擊量:3907

           在很多的時候會不自覺的講液相色譜儀與氣相色譜儀進行比較,看它們各自的構(gòu)成及其特點,這里介紹液相色譜儀的主要系統(tǒng)構(gòu)成及特點,包括輸液系統(tǒng)、分離系統(tǒng)、檢測系統(tǒng)和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)等,并且各自有著與眾不同之處:

          *.分離系統(tǒng),相對來說分離系統(tǒng)由色譜柱、連接管和恒溫器等部分構(gòu)成,色譜柱一般長度為1050cm(需要兩根連用時,可在二者之間加一連接管),內(nèi)徑為25mm,由"不銹鋼或厚壁玻璃管或鈦合金等材料制成,住內(nèi)裝有直徑為510μm粒度的固定相(由基質(zhì)和固定液構(gòu)成).固定相中的基質(zhì)是由機械強度高的樹脂或硅膠構(gòu)成,它們都有惰性(如硅膠表面的硅酸基因基本已除去)、多孔性(孔徑可達1000?)和比表面積大的特點,加之其表面經(jīng)過機械涂漬(與氣相色譜中固定相的制備一樣),或者用化學(xué)法偶聯(lián)各種基因(如磷酸基、季胺基、羥甲基、苯基、氨基或各種長度碳鏈的烷基等)或配體的有機化合物。因此,這類固定相對結(jié)構(gòu)不同的物質(zhì)有良好的選擇性。

          另外,固定相基質(zhì)粒小,柱床極易達到均勻、致密狀態(tài),極易降低渦流擴散效應(yīng)?;|(zhì)粒度小,微孔淺,樣品在微孔區(qū)內(nèi)傳質(zhì)短。這些對縮小譜帶寬度、提高分辨率是有益的。根據(jù)柱效理論分析,基質(zhì)粒度小,塔板理論數(shù)N就越大。這也進一步證明基質(zhì)粒度小,會提高分辨率的道理。再者,液相色譜儀的恒溫器可使溫度從室溫調(diào)到60C,通過改善傳質(zhì)速度,縮短分析時間,就可增加層析柱的效率。

          第二.進樣系統(tǒng),一般采用隔膜注射進樣器或高壓進樣間完成進樣操作,進樣量是恒定的。這對提高分析樣品的重復(fù)性是有益的。

          第三.輸液系統(tǒng),

          液相色譜儀的輸液系統(tǒng)包括高壓泵、流動相貯存器和梯度儀三部分。流動相貯存錯和梯度儀,可使流動相隨固定相和樣品的性質(zhì)而改變,包括改變洗脫液的極性、離子強度、PH值,或改用競爭性抑制劑或變性劑等。這就可使各種物質(zhì)(即使僅有一個基團的差別或是同分異構(gòu)體)都能獲得有效分離。

          高壓泵的一般壓強為l4744X107Pa,流速可調(diào)且穩(wěn)定,當高壓流動相通過層析柱時,可降低樣品在柱中的擴散效應(yīng),可加快其在柱中的移動速度,這對提高分辨率、回收樣品、保持樣品的生物活性等都是有利的。

          第四,就是數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)該系統(tǒng)可對測試數(shù)據(jù)進行采集、貯存、顯示、打印和處理等操作,使樣品的分離、制備或鑒定工作能正確開展。

          第五.檢測系統(tǒng)液相色譜儀常用的檢測器有紫外檢測器、示差折光檢測器和熒光檢測器三種。

          1.紫外檢測器主要擁有這樣的特點:使用面廣(如蛋白質(zhì)、核酸、氨基酸、核苷酸、多肽、激素等均可使用);靈敏度高(檢測下限為10-10gml);線性范圍寬;對溫度和流速變化不敏感;可檢測梯度溶液洗脫的樣品。

          2.示差折光檢測器目前這一系統(tǒng)通用性強、操作簡單,但靈敏度低(檢測下限為10-7gml),流動相的變化會引起折光率的變化,因此,它既不適用于痕量分析,也不適用于梯度洗脫樣品的檢測。

          3.熒光檢測器凡具有熒光的物質(zhì),在一定條件下,其發(fā)射光的熒光強度與物質(zhì)的濃度成正比。因此,這一檢測器只適用于具有熒光的有機化合物(如多環(huán)芳烴、氨基酸、胺類、維生素和某些蛋白質(zhì)等)的測定,其靈敏度很高(檢測下限為10-1210-14gml),痕量分析和梯度洗脫作品的檢測均可采用。

          通過以上的信息可以看出一個液相色譜儀的設(shè)計時很復(fù)雜的,在很多的方面需要協(xié)調(diào)性,并且分工合理,該液相色譜儀也是一款性能相當不錯的色譜儀!

          

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